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siRNA转染实验步骤 - 实验动物

发表于:2019-06-14 19:12 来源:本站原创

siRNA转染实验步骤 - 实验动物

siRNA转染实验步骤 - 实验动物

下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下siRNA转染步骤(24孔板)1.提前1天细胞种植贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。 如某细胞常规培养的细胞数是6105,那么就用2105的细胞进行转染。

2.转染过程⑴取(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25l。

注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

⑵取1ul的Entranster-R4000,然后加入24ul无血清稀释液体,充分混匀,制成Entranster-R4000稀释液,终体积为25l。

室温静置5分钟。 ⑶将Entranster-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合,室温静置15分钟。 转染复合物制备完成。

⑷将50l转染复合物滴加到有全培养基(可含10%血清和抗生素)的细胞上,前后移动培养皿,混合均匀。 注意:对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。

⑸转染后6小时观察细胞状态,如状态良好可不必更换培养基,继续培养24-96小时得到结果。


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